作業ポイント

※1 酸化

作業		色変化
0.25%過マンガン酸カリウム水溶液 15分		赤茶色になる

※2 漂白

作業		色変化
２％シュウ酸水溶液 １分		シュウ酸に入れる前 入れた後（白くなる）

※3 水洗、鍍銀、洗浄

作業
水洗 蒸留水 １分×３回 ここからプラスチック製ピンセットを使う 鍍銀 アルカリヨウ化銀液 ２〜５分 洗浄 0.5%酢酸水溶液 １分×３回

※4 還元、洗浄

作業		色変化
還元 冷やした液を用いてゆっくりと反応させる。 切片全体の構造がわかる程度に薄く色づくまで反応させる。 色の変化を見るために、シャーレの中で反応させる。 反応時間は多くの場合10分を超えるが、切片によって反応時間は異なるため注意する ※切片A：5分で色づき15分で終了 ※切片B：13分で色づき17分で終了 還元液を常温で反応させると、反応は非常に早く進み制御できないため、必ず冷やした還元液を用いること。 洗浄 0.5%酢酸水溶液 １分×３回	還元液は時間とともに黒ずむ。液を入れたまま放置するとガラス器具に銀鏡反応による汚れがつき落ちなくなるため、使用後は速やかに器具を洗うこと。	切片A 8分後：うっすらと部分的に黒褐色になる 15分後：全体の構造が黒褐色に浮かび上がる 20分後：黒褐色に塗りつぶされる。全体の構造は分かりづらい。 切片B 13分後：うっすらと部分的に黒褐色になる 17分後：全体の構造が黒褐色に浮かび上がる

※5 水洗、鍍金

作業		色変化
水洗 蒸留水 １分×３回 鍍金 １%塩化金水溶液 5分〜15分		還元8分：白くなる 還元15分：灰色になる。余分な色がおちて輪郭が明瞭になる 還元20分：黒灰色になる

※6 流水洗

作業
水道水 数分 ここから金属製器具を使用しても良い

※7 定着

作業		色変化
写真の定着液（10倍希釈）もしくは5%チオ硫酸ナトリウム水溶液 10分		還元8分：ごくうすい薄紫 還元15分：薄紫 還元20分：灰紫

※8 流水洗

作業
水道水 10分以上

※9 核染

作業
核染（ケルンエヒトロート） １〜５分程度

染色結果

還元時間の違いによる染色結果の違い

還元8分	還元15分	還元20分
40倍 200倍 400倍 zoomify画像 クリックすると拡大画像を見ることができます。	40倍 200倍 400倍 zoomify画像 クリックすると拡大画像を見ることができます。	40倍 200倍 400倍 zoomify画像 クリックすると拡大画像を見ることができます。

還元8分

全体的に色が薄い。この染色の陽性像とはならない。

還元15分

細かな線維の様子も把握できる程度に黒くしっかりと染色されている。

還元20分

背景が黒く染まっている。細胞は黒く塗りつぶされるように染まり、細かな構造は分からない。

還元液の反応の注意事項

還元液の温度

常温の還元液では反応が早く進みすぐに全体が黒褐色にぬりつぶされてしまう。

反応を制御するためには、冷えた還元液でゆっくりと反応を進めること。

冷えた還元液：5分経過

常温の還元液：5分経過

スライドガラスの種類

MASコートのスライドガラスはガラス全体が黒くなってしまうので、使用しない方がよい（染色はできる）。

我々はシランコーティングや卵白アルブミンコーティングを使用している。

冷えた還元液：5分経過

試薬

1. 0.25%過マンガン酸カリウム水溶液
2. 2%シュウ酸水溶液
3. アルカリヨウ化銀液
4. 0.5%酢酸水溶液
5. 還元液（A液とB液の混合液）
6. 1%塩化金水溶液
7. 写真の定着液（10倍希釈）

試薬の調整

アルカリヨウ化銀液

蒸留水に水酸化ナトリウム、ヨウ化カリウムの順に溶かしてから、１％硝酸銀水溶液をゆっくりと混ぜる。

硝酸銀が入ると白濁するが混ぜると透明になる。

水酸化ナトリウム	４g
ヨウ化カリウム	10g
１％硝酸銀水溶液	3.5ml
蒸留水	100ml

還元液（A液とB液の混合液）

A液

蒸留水に硝酸アンモニウム、硝酸銀、ケイタングステン酸の順に溶かし、最後にホルムアルデヒド水溶液を加える。

硝酸アンモニウム	0.2g
硝酸銀	0.2g
ケイタングステン酸	1g
ホルムアルデヒド水溶液（37〜38%）	0.5ml
蒸留水	100ml

B液

蒸留水に無水炭酸ナトリウムを溶かす。

無水炭酸ナトリウム	5g
蒸留水	100ml

還元液

使用直前にB液に等量のA液を少しづつ注いで良く撹拌する。A液が入ると白濁するが、混ぜると透明になる。

１％塩化金水溶液

繰り返し使用可能である。使用後濾過し、冷蔵保存する

塩化金	１g
蒸留水	100ml

試薬の調整ワンポイント

使用する試薬の種類が多く手間がかかる印象があるが、何回も使用できる試薬や作り置きすることができる試薬が多いため、一度用意すればさほど手間はかからない。

作り置きすると便利な試薬

還元液A液およびB液 （冷蔵保存。使用時に必要量の還元液を調整）	アルカリヨウ化銀液（冷蔵保存）	1%硝酸銀水溶液（冷蔵保存）   ※ 長期保存すると黒く変色してくるので注意する
1%塩化金水溶液（冷蔵保存）	2%シュウ酸水溶液	定着液

※1%塩化金水溶液、2%シュウ酸水溶液、定着液は、長期保存が可能で他の銀染色にも使用できるため、常備すると便利である。

複数回使用可能な試薬（冷蔵保存）

一度使用した試薬を後日再利用できる試薬がある。

① 連日染色する際に再利用できる試薬

• 0.25%過マンガン酸カリウム水溶液：数回は再利用できる。しかし長期保存すると変色するので１週間をめどに廃棄する。
• 2%シュウ酸水溶液：一度に染める枚数にもよるが１、２回は再利用できる。

② 長期間に渡って繰り返し使用できる試薬

• アルカリヨウ化銀液：使用後濾過。白濁するようなら廃棄する。
• 1%塩化金水溶液：使用後濾過。この溶液は長持ちする。

染色態度

神経細胞

正常細胞・組織	異常構造・生理的変性構造	見えないもの
	リン酸化タウ蓄積： NFT、ピック球（薄い）	アクロマジア

神経突起

正常細胞・組織	異常構造・生理的変性構造	見えないもの
	リン酸化タウ蓄積： ニューロピルスレッド、グレイン

アストロサイト

正常細胞・組織	異常構造・生理的変性構造	見えないもの
	リン酸化タウ蓄積： 房状アストロサイト、アストロサイト斑 棘様アストロサイト

オリゴデンドログリア

正常細胞・組織	異常構造・生理的変性構造	見えないもの
	リン酸化タウ蓄積： グリアコイル小体、嗜銀性スレッド リン酸化αシヌクレイン蓄積： グリア細胞質内封入体（多系統萎縮症）

動画でまなぶ染色態度