⑫ 染色
アザン(Azan)染色
線維性結合組織のうち膠原線維(コラーゲン)を青色に染色する。
染色手順
1 | 脱パラフィン | キシレン | 3槽、各10分 |
2 | 脱キシレン | 100%エタノール | 3槽、各5分 |
3 | 浸水 | 95%、70%エタノール | 各5分 |
4 | 流水洗 | 水道水 | |
5 | 水洗 | 蒸留水 | |
6 | 染色 ※1 | アゾカルミンG染色液(50℃) | 50℃で1時間の後に室温で1時間 |
7 | 流水洗 | 水道水 |
8 | 分別 ※2 | アニリンアルコール | 細胞核が際立つまで分別する(省略可) |
9 | 洗浄 | 酢酸アルコール | 1〜2分(⑧を省略した際は省略する) |
10 | 流水洗 | 水道水 | |
11 | 媒染 ※3 | 5%リンモリブデン酸水溶液 | 3時間または1晩 |
12 | 流水洗 | 水道水 | |
13 | 水洗 | 蒸留水 | |
14 | 染色 ※4 | アニリン青・オレンジG混合液 | 15〜30分。染色後、濾紙で余分な染色液を拭き取る。 |
15 | 分別 ※5 | 100%エタノール | 3槽、切片を上下に動かす |
16 | 検鏡 | | 青と赤が鮮やかに染め分けられるまで分別する |
17 | 透徹 | キシレン | 3槽、各10分 |
18 | 封入 | | |
作業ポイント
※1 染色
作業 |
アゾカルミンG染色液
- 染色液は事前に温めておく
- 色素が溶けずに浮遊している場合は撹拌しておく
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※2 分別
作業 |
アニリンアルコール
- 数回切片を上下させてから検鏡し分別の程度をチェックする
- 分別の目安:細胞核が識別できるまで。基質がピンク色になる程度
- 分別作業は切片一枚ずつ行うことが理想
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※3 媒染
作業 |
リンモリブデン酸水溶液
- アゾカルミンGがさらに分別される
- たまに切片を上下させる
- 一晩入れても良いが、分別しすぎに注意する
- アゾカルミンGを上手く分別するとアニリン青・オレンジGの色の乗り方も上手くいく感触がある
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※4 染色
※5 分別
作業 |
100%エタノール3槽
- しばらく放置すると徐々にアニリン青・オレンジGの色がぬけていく
- 検鏡し分別の程度をチェックする
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染色液および分別液
アゾカルミンG染色液
アゾカルミンG | 0.1g |
蒸留水 | 100ml |
氷酢酸 | 1ml |
※ 使用時に濾過する。繰り返し使用可。
アニリンアルコ-ル
酢酸アルコ-ル
燐タングステン酸水溶液
燐タングステン酸(燐モリブデン酸で代用可) | 5g |
蒸留水 | 100ml |
アニリン青・オレンジG混合液
アニリン青(水溶性) | 0.5g |
オレンジG | 2g |
氷酢酸 | 8ml |
蒸留水 | 100ml |
この混合液を煮沸、冷却、濾過し、使用の際には原液を3倍~5倍量に希釈して用いる。
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染めあがり
膠原線維および細網線維は深青色、粘液は青色、赤血球は深紅色、筋線維は赤色、神経膠細胞および神経細胞は赤紫色、細胞内分泌顆粒は好塩基性のものは青、好酸性のものは赤、好中性のものは中間色、硝子様物質は一般に青色、硝子滴変性物質は赤、線維素は赤色を呈する。
大腸
大腸拡大
肝臓・小葉間結合組織