⑫ 染色

ベルリン青（Berlin blue）染色

３価鉄を青色に染色する方法。へモジデリンを検出できる。この反応は鋭敏で、微量の鉄を検出できる。

染色手順

1	脱パラフィン	キシレン	3槽、各10分
2	脱キシレン	100%エタノール	3槽、各5分
3	浸水	95%、70%エタノール	各5分
4	流水洗	水道水
5	水洗 ※1	蒸留水	3回
6	染色 ※1	フェロシアン化カリウム・塩酸混合液	15〜30分
7	水洗 ※2	蒸留水	３回
8	核染 ※2	ケルンエヒトロート	5分
9	流水洗 ※3	水道水
10	脱水	70%、95%エタノール	各5分
11	脱水	100%エタノール	3槽、各5分
12	透徹	キシレン	3槽、各10分
13	封入

作業ポイント

※1 水洗、染色

作業

水洗

蒸留水洗
1分×3回
ここからプラスチック製ピンセットを使う

染色

染色液：フェロシアン化カリウム・塩酸混合液

15分〜30分
（鏡顕しながら染まり具合を確認し、染まりが悪い場合はさらに30分追加する）
湿潤箱を使うことで使用する液量を少なくすることができる
色の変化を見やすくするために湿潤箱に白い紙を敷く

※2 水洗、核染

作業

水洗

蒸留水1〜3槽
各槽で5〜10回切片をゆらす

核染

染色液：ケルンエヒトロート

5分
作りたての染色液を使用する場合、濃く染まるので時間を30秒〜3分程度に短く調整する

※3 流水洗

作業
水道水数分鏡顕しながら核の染まり具合や細胞の染まり具合を確認する。不十分の場合はさらに水洗する

染色液

1液：2%フェロシアン化カリウム
2液：1%塩酸水

1液と2液を使用直前に等量混合

ケルンエヒトロート

染色液の経時変化

フェロシアン化カリウムは遮光瓶に入れて保存する。

最初は淡黄色透明だが、長時間光に晒されることで色調が濃く変化する。

フェロシアン化カリウム・塩酸混合液は時間経過とともに緑色調を呈する。

変色した染色液は染色性が低下するため、染色液は使用直前に混合して使い切る。

混合直後	30分後	3時間後	数日後

染色結果

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混合直後	混合後３日目

混合後に時間が経った染色液で染色すると染色性は低下する。